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qPCR 用于確定多個(gè)樣品中基因表達(dá)的穩(wěn)態(tài) mRNA 水平的變化,通常歸一化為內(nèi)部對照基因的相對表達(dá)。基因特異性引物可擴(kuò)增從 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄的 cDNA 庫中的靶序列,并且與 TaqMan® 技術(shù)一樣,雜交序列特異性探針提供來自 Taq DNA 聚合酶的 5' 核酸外切酶活性的熒光信號。熒光信號的積累速率用于定量樣品 cDNA,從而定量原始細(xì)胞裂解物中 mRNA 的量。
該 qPCR 芯片包含經(jīng)驗(yàn)證的引物和探針,用于檢測 90 個(gè)基因,這些基因的表達(dá)與處于分化早期階段的未分化 hPSC 或其衍生物相關(guān),以及 6 個(gè)內(nèi)源性(管家)對照基因。TBP(TATA 盒結(jié)合蛋白)qPCR 對照模板作為合成 DNA 陽性對照提供。
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