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凍存方法:準(zhǔn)備所需凍存細(xì)胞,貼壁細(xì)胞按以下步驟進(jìn)行消化重懸:1、將培養(yǎng)皿中的原培養(yǎng)基棄之,用 PBS 清洗細(xì)胞
2、將 PBS 棄之,加 Trypsin/EDTA-PBS 室溫孵育5 分鐘
加入新的含血清培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打懸浮細(xì)胞;如果凍存細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,以上步驟可忽略,直接進(jìn)行步驟4:3.將細(xì)胞懸液或者懸浮細(xì)胞液轉(zhuǎn)移至離心管,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);
細(xì)胞懸液 200-300g 離心5分鐘,上清液棄之:
加入預(yù)冷好的 LaboBanker2 凍存液重懸細(xì)胞至密度為 5x105個(gè)/ml至 5x106個(gè)/ml;
將細(xì)胞懸液分裝入凍存管,每管體積為 0.5ml至 1ml;
將細(xì)胞置于 2-8°℃5 分鐘:G
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至-80℃保存。如需長(zhǎng)期保存,-80℃C過(guò)夜將細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至液氨中。
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